一 产品介绍
Neofect™ DNA transfection reagent 是由零客创智（北京）生物科技有限公司研发合成的以非脂
阳离子聚合物为主的转染试剂，是新一代非病毒转染试剂。 可以与 DNA 形成稳定的复合物，透过细
膜进入细胞内，并保护 DNA 免受核酸酶的降解。该试剂对细胞毒性很小，可在含血清与抗生素的完全
养基中充分发挥作用。对多数培养细胞都有较高的转染效率（不同种类细胞的转染效率可有明显差异）
本品推荐用于贴壁动物细胞的转染，用于质粒等 DNA的转染。
二 产品特征
高效、低毒、广谱、操作简单。
三 实验流程 （以 6孔板为例）
1．细胞铺板
提前一天将细胞种植在六孔板中，以转染时细胞密度在 60%-80%为宜。
2．转染过程
(1) 在转染前 2小时，移除细胞上原有的培养基，换为新鲜的完全培养基。
(2) 将 2µg质粒 DNA用 100 μL无血清稀释液稀释，充分混匀后制成 DNA稀释液。
注意：无血清稀释液建议采用Opti-MEM，无血清 DMEM或 150 mM NaCl溶液。
(3) 向 DNA稀释液中直接加入 2 μL Neofect™，轻柔混匀，室温静置 15-30分钟。转染复合物制备完成
(4) 将转染复合物加入细胞培养基中，轻柔混匀。
(5) 继续培养 24-48小时，收取细胞进行鉴定或加入相应抗生素筛选稳定克隆。
(table.1)不同细胞培养容器转染用量
| 细胞培养容器 | 表面积 | 稀释液体积 | DNA的量 | Neofect™的量 | 培养基总量 |
|---|---|---|---|---|---|
| 96-well | 0.3 cm2 | 10 µl | 0.1 µg | 0.1 µl | 100 µl |
| 48-well | 0.7 cm2 | 20 µl | 0.2 µg | 0.2 µl | 200 µl |
| 24-well | 1.9 cm2 | 50 µl | 0.5 µg | 0.5 µl | 500 µl |
| 12-well | 3.8 cm2 | 50 µl | 1 µg | 1 µl | 1 ml |
| 6-well/35 mm dish | 10 cm2 | 100 µl | 2 µg | 2 µl | 2 ml |
| 60 mm dish/T25 flask | 21 cm2 | 200 µl | 4 µg | 4 µl | 4 ml |
| 100 mm dish/T75 flask | 58 cm2 | 500 µl | 10 µg | 10 µl | 10 ml |
四 储存与安全
本品常温运输，储存于4℃，有效期12个月。
五 使用限制
本转染试剂仅限于科研用途。
